血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒
Vascular Smooth Muscle Cell Calcification Kit
貨號(hào)：YJ-YD-005
價(jià)格： 1280.0
規(guī)格： 200ml
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
Vascular Smooth Muscle Cell Calcification Kit 血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒 | YJ-YD-005 | 200ml | 避光 |
產(chǎn)品描述
由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒，包括適合血管平滑肌細(xì)胞鈣化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、鈣化因子和雙抗。
本產(chǎn)品可增強(qiáng)VSMCs細(xì)胞的鈣化能力。 本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
試劑盒組成部分
規(guī)格 | 200mL/Kit | |
體積 | 數(shù)量 | |
Vascular Smooth Muscle Cell Calcification Basal Medium 血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 173mL | 1 |
Supplement Mix 鈣化因子 | 25mL | 1 |
Penicillin-Streptomycin 雙抗 | 2mL | 1 |
使用方法
血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基的配制
1. 使用前，請(qǐng)將鈣化因子置于2-8℃環(huán)境中過(guò)夜解凍直至鈣化因子完全溶解，解凍后輕晃試劑瓶以確保鈣化因子混合均勻，隨后即可使用。
注意：解凍后的鈣化因子中可能會(huì)含有少量絮狀沉淀，這些物質(zhì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)影響。不建議采取 過(guò)濾的方法去除沉淀物，此操作會(huì)導(dǎo)致鈣化因子中部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失。
2. 用75%乙醇擦拭試劑盒中各瓶/管的開(kāi)口外壁，室溫放置數(shù)秒使酒精揮發(fā)。
3. 在超凈臺(tái)中無(wú)菌地打開(kāi)以上各瓶/管。
4. 將25 mL鈣化因子和2 mL雙抗全部加入173 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即可配 成200 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基。
注意：
① 無(wú)菌吸取少量基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌各瓶/管，盡可能的將所有組分完整的加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。
② 輕晃配制好的完全培養(yǎng)基，確?；旌暇鶆蛑蠹纯墒褂?。
③ 完全培養(yǎng)基試劑盒中的每個(gè)成分均為無(wú)菌分裝，但為確保完全無(wú)菌， 也可以將混合后的完 全培養(yǎng)基進(jìn)行再次過(guò)濾除菌（0.22 μm 濾膜）。
培養(yǎng)器皿表面的包被
為了避免誘導(dǎo)過(guò)程中血管平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)漂浮現(xiàn)象，建議對(duì)鈣化誘導(dǎo)使用的培養(yǎng)器皿表面用促貼壁試劑包被。
所需材料
促貼壁試劑（AS01-001D）
操作
1. 加適量促貼壁試劑到培養(yǎng)器皿中，能覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿底面的量即可。
2. 搖勻液體使其覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿的底面。
3. 將鋪有促貼壁試劑的培養(yǎng)器皿放置在超凈臺(tái)至少30min。
4. 30 min后棄去促貼壁試劑，待培養(yǎng)器皿晾干后，即可用于接種細(xì)胞。
注意: 包被促貼壁試劑的培養(yǎng)器皿在無(wú)菌和不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。
血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化操作規(guī)程
所需材料
n 0.25% 胰蛋白酶-EDTA
n Phosphate-Buffered Saline (1×PBS) （貨號(hào)：YJ-0800）
n 血管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基（貨號(hào)：PriMed-YJ-004）
n 血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒（貨號(hào)：YJ-YD-004） 操作
注意：本操作規(guī)程以六孔板為例
1. 將血管平滑肌細(xì)胞置于37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%時(shí)，用0.25% 胰蛋白酶-EDTA進(jìn)行消化。
3. 將消化下來(lái)的血管平滑肌細(xì)胞按照2×104 cells/cm2 的細(xì)胞密度接種在事先包被促貼壁試劑的六孔 板中，每孔加入2 mL完全培養(yǎng)基。。
4. 將細(xì)胞置于37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%左右時(shí)，小心的將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入2 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基。
6. 每隔2-3天換用新鮮的血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基（使用前需預(yù)熱至37℃）
7. 誘導(dǎo)15-20天后，視細(xì)胞的形態(tài)變化及生長(zhǎng)情況，用鈣化鑒定試劑盒進(jìn)行染色。
注意：為防止誘導(dǎo)后的細(xì)胞脫落，建議鈣化過(guò)程中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊績(jī)商煲淮伟肓繐Q液。
產(chǎn)品穩(wěn)定性及保存條件
1.所有產(chǎn)品均需避光保存。
2.保存條件及有效期
試劑名稱 | 保存條件 | 有效期 |
血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 2-8℃ | 1年 |
鈣化因子 | -20℃ | 2年 |
配制好的完全培養(yǎng)基 | 2-8℃ | 1個(gè)月 |
3.所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用，超過(guò)保質(zhì)期，必須放棄使用。
4.為確保產(chǎn)品效果，請(qǐng)避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。
質(zhì)量控制
血管平滑肌細(xì)胞鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)基已用各種屬血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行了性能測(cè)試。
主要的鑒定標(biāo)準(zhǔn)包括：
• 無(wú)菌檢測(cè)（細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè)）
• pH測(cè)試
• 滲透壓檢測(cè)
• 內(nèi)毒素檢測(cè)
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