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實驗意義

1.可應用于闡明基因組結(jié)構(gòu)與功能以及基因之間相互作用的科學,對于探索基因在生命活動中的作用及其機制具有重要意義。

2.能夠為一些疾病提供新的診斷方法和治療方法，可有助于醫(yī)生獲得更多治療信息并進行個性化精準醫(yī)療。

實驗原理及步驟

1. siRNA的設計和選擇:根據(jù)研究目的選擇合適的數(shù)據(jù)庫及軟件篩選靶序列的siRNA,通常需要設計多個siRNA,找到zui you zui有效的siRNA序列;

2. siRNA的制備:常用的體外制備方法有化學合成、體外轉(zhuǎn)錄、長片段dsRNA經(jīng)RNase Il類降解，以及通過siRNA表達質(zhì)粒載體或者病毒載體以及PCR制備的siRNA表達框架(siRNA expression cassettes, SECs)在細胞中表達制備siRNA;

3. siRNA的轉(zhuǎn)染: siRNA. siRNA表達載體或者siRNA表達框架轉(zhuǎn)染進入細胞的方法主要有磷酸鈣共沉淀轉(zhuǎn)染、電穿孔轉(zhuǎn)染機械法(顯微注射和基因槍) . 陽離子脂質(zhì)體試劑轉(zhuǎn)染;

4.檢測靶基因的表達: WB等方法檢測靶基因的表達或者可以通過標記siRNA(如熒光標記)分析其表達，還可用作siRNA胞內(nèi)定位和雙標記實驗來追蹤轉(zhuǎn)染過程以及靶基因表達沉默過程。

實驗周期及交付標準

1.實驗周期: 2-4周

2.交付標準:質(zhì)粒、片段驗證結(jié)果、實驗報告(實驗步驟.試劑、儀器等)

需確認的信息

1.基因的種屬及ID號

2.基因序列

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