凝膠遷移或電泳遷移率EMSA實驗
實驗意義
EMSA是轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法。今年來基因分子生物學研究領域的趨勢之一是從基因結(jié)構(gòu)和功能分析轉(zhuǎn)向基因順式作用元件和反式作用因子(轉(zhuǎn)錄因子)及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制上，對基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究是表觀遺傳學和功能基因組學的熱點。
實驗原理及流程
凝膠遷移或電泳遷移率檢測(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)是--種檢測DNA序列和蛋白質(zhì)相互作用的技術。將純化的蛋白與細胞粗提液以及同位素標記的DNA或者RNA探針--同孵育，然后通過非變性的聚丙烯凝膠電泳分離核酸蛋白質(zhì)復合物以及未結(jié)合的探針，核酸蛋白質(zhì)復合物(DNA-蛋白質(zhì)復合物或RNA-蛋白質(zhì)復合物)比未結(jié)合的探針遷移速度慢，從而檢測DNARNA序列與蛋白質(zhì)的相互作用。
結(jié)果展示[1,2]
實驗完成周期及交付標準
1.實驗周期: 4-7周
2.交付標準: X光片、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器)
需確認的信息
1.目的基因與蛋白信息
2.樣本種屬及類型
3.是否提供抗體
參考文獻
[1]MillerD E , PatelZH , LuX, et al. Screening for Functional Non-coding Genetic Variants Using Electrophoretic
Mobility Shift Assay (EMSA) and DNA- afinity Precipitation Assay (DAPA)J]. Journal of Visualized Experiments Jove,
2016, 2016(114).
[2] Pares-Matos EL. Electrophoretic Mobility-Shift and Super-Shift Assays for Studies and Characterization of Protein-
DNA Complexes[M]/ Gene Regulation. Humana Press, 2013.
[3] Bak G , Han K, Kim K, et al. Electrophoretic mobility shift assay of RNA-RNA complexes [J]. Methods in Molecular
Biology, 2015, 1240:153.
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